Published: 2015
Total Pages: 262
Get eBook
La major part de fàrmacs dissenyats per tractar malalties del sistema nerviós central no són efectius perquè no poden creuar la barrera hematoencefàlica (BHE). Una de les estratègies més prometedores per superar aquest obstacle és l'ús de llançadores peptídiques. Tanmateix, l'eficiència i selectivitat d'aquests encara s'ha de millorar. Els objectius principals de la tesi eren, per una banda, trobar noves llançadores resistents a proteases i, per l'altra, augmentar el transport d'anticossos monoclonals a través de la BHE. Tenint en compte que l'apamina és un pèptid del verí de l'abella que creua la BHE, vam iniciar l'estudi demostrant que els residus implicats en la toxicitat no eren necessaris pel transport. Aleshores vam generar anàlegs simplificats i MiniAp-4 va mostrar el millor compromís entre estabilitat en sèrum, permeabilitat i immunogenicitat. Aquest pèptid va incrementar el transport de la GFP, quantum dots i nanopartícules d'or en un model cel·lular humà de BHE. A més, va augmentar en 7,6 vegades la concentració de cianina-5.5 en el cervell de ratolins. Pel que fa el transport d'anticossos, vam posar a punt diversos mètodes per conjugar els pèptids llançadora a diferents parts de la immunoglobulina, incloent els extrems Nterminals, les cadenes glicosídiques, les lisines i les cisteïnes. Cap conjugació va disminuir l'afinitat dels anticossos pels seus epítops exceptuant la del N-terminal. Vam escollir la modificació de les cisteïnes utilitzant química tiol-maleimida i també la de les lisines mitjançant cicloaddició alquí-azida catalitzada per coure (Cu15C) per generar conjugats emprant diverses llançadores. Alguns d'aquests van mostrar un transport significativament més elevat que l'anticòs sol en el model cel·lular humà de BHE, en especial una mini-apamina i el RVG29 enllaçats mitjançant Cu15C. La major eficiència de les llançadores amb aquesta unió és atribuïble a la major accessibilitat per interaccionar amb els seus receptors. Per concloure, en aquesta tesi hem generat anàlegs d'apamina resistents a protaeses, més reduïts, menys tòxics i menys immunogènics. A més, MiniAp-4 és capaç de transportar diversos compostos a través de la BHE in vitro i in vivo. També hem demostrat que el transport d'anticossos es pot augmentar mitjançant diferents llançadores peptídiques, incloent les mini-apamines.